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重组肠激酶（rEK）是高纯度的牛肠激酶轻链亚基，它有着和天然提取的肠激酶同样特异的切割酶活性，切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，本rEK具有比天然酶更高的切割活性。

本制品为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶，适用范围广，并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本制品不含标签，由于具有极高酶切活性，酶切反应使用量少，不影响下游蛋白应用，故后续不需将其去除。

本制品用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg，理论分子量为25.850kDa。

• 配制反应体系
  

  融合蛋白	0.05～0.1mg（蛋白浓度：0.1～1mg/mL）
  肠激酶	0.1～0.2U
  缓冲体系	25mM Tris-HCL 8.0

  
  注：
  
  • 重组肠激酶可使用25mM Tris-HCl pH8.0稀释成每1μL含0.1单位的溶液使用。
    
  • 缓冲液的使用体积等比例融合蛋白和酶使用量的总和。
• 25℃过夜酶切。
  注：完全酶切需要16-24h，该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。

• 本制品所讲述的缓冲体系需要自行配置。
  
• 在＞200mM咪唑，或＞200mM NaCl，或＞5%甘油，酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种，为获得理想的酶切结果，请先将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，然后再进行酶切实验；若不方便透析，可将样品稀释，使得各组分低于干扰浓度后再酶切，酶的用量与蛋白比例不变；若干扰因素很多，且不便去除，需要适当增加酶量或延长酶切时间，有助于得到理想的酶切效果。
  
• 磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性，因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
  
• 本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。
  
• 蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。

• 如果需要去除重组肠激酶，该如何去除？
  本品不含标签，后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（例如DEAE-FF）对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下：
  平衡缓冲液：25mM Tris-HCl pH8.0
  洗脱缓冲液：25mM Tris-HCl pH8.0，含100mM NaCl
  注：
  ① 如果使用纯化柱，注意流速不要太快。确保样品与胶的接触时间不少于10min。也可以直接将胶加入到酶切缓冲液中直接动态吸附30min。
  ② 如酶切缓冲液中含有其他成分，如NaCl，甘油等，会影响吸附效果。